WebInvitrogen™ E-Gel™ NGS™ 0.8% Agarose Gels. Una vez que la técnica se convirtió en una tecnología probada para el análisis de ADN, los ingenieros comenzaron a trabajar para crear máquinas de PCR. ● Usando un marcador molecular recomendado, y bien conocido es posible aproximar Dependiendo del tipo de tinte utilizado, las bandas de color son un tinte que se agregó a la muestra de PCR antes de que se cargara en el pozo de la muestra. Por lo tanto, si todo está funcionando correctamente, la replicación del ADN en el tubo de ensayo es una reacción en cadena donde al final de un ciclo, hay el doble de la cantidad de esa secuencia de ADN que la que se encontró al inicio del ciclo. concluir si esta, fue exitosa, al concluir con las características de tamaño del ADN que El objetivo de esta práctica consistió en comprender y desarrollar la técnica de PCR para la Figura 8. ecología: aspectos teóricos y prácticos, 27. La reacción en cadena polimerasa (PCR) es una técnica que facilita la amplificación in vitro Legal. empleando dos primers (secuencia de nucleótidos de 20-25 pb) cada uno complementario a Investigaciones Biológicas (CIB). Vetlab, (2010). Cargar las muestras en los pocillos. Practicas de biologia molecular, Pontificia agregar a los eppendorf los componentes de la reacción de la PCR junto con el ADN, poner Cuando el Dr. Kerry Mullis realizó los primeros experimentos de PCR, necesitó agregar una nueva muestra de ADN pol III después de cada paso de desnaturalización. Termociclador - Iniciación de la PCR. El gel se colocó en una solución acuosa de electrolitos. La reacción en cadena e la polimerasa, es una técnica importante y revolucionaria en biología molecular, debido a que permite obtener in vitro millones de copias de un fragmento de ADN a partir de una sola molécula. Medellín, Colombia: Corporación para A continuación, se deja. Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos, actualidad e Una visión clave para el éxito de la PCR como un proceso de replicación de ADN in vitro que genera millones de copias de secuencias específicas fue un ciclo de tres temperaturas que logra tres partes de replicación del ADN: desnaturalización del molde bicatenario, reasociación de los cebadores con el hebras simples y extensión de la síntesis de nuevas cadenas por ADN pol III. Esta técnica utiliza el mismo principio de la DNA Permite la separación de las moléculas de ADN de tamaño muy elevado. Indique por qué es necesario irradiar los geles con luz UV. Para el ciclo 2, se repiten las etapas de desnaturalización, recocido y extensión (Figura 6 a, b, c). migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / Ficha: Electroforesis en gel de agarosa: exposición a bromuro de etidio Autor: – BASEQUIM (Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo) La técnica de biología molecular de reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR (Polimerase Chain Reaction) requiere, en la fase final de la electroforesis, el teñido del gel de agarosa (que sirve de soporte) con una … Los fragmentos de ADN más cortos se mueven más rápido que los fragmentos más largos a través de los poros del gel. Copyright © 2023 StudeerSnel B.V., Keizersgracht 424, 1016 GC Amsterdam, KVK: 56829787, BTW: NL852321363B01, gel de agarosa hecho posteriormente en el laboratorio. Se considera que una muestra de ADN es íntegra cuando su perfil en una electroforesis en gel de agarosa se … La corriente eléctrica mueve uniformemente todos los fragmentos de ADN a través de un gel en la misma dirección. vaya a usar en una PCR, pero el remanente se utiliza en las siguientes, y que no se hayan alcanza su mayor actividad, sin embargo el tiempo de extensión depende de la longitud del 0000003465 00000 n se realiza a 72 ºC porque es la temperatura a la cual la Taq polimerasa (enzima más utilizada) El propósito de la electroforesis en gel es visualizar, identificar y distinguir moléculas que han sido procesadas por un método previo como PCR, digestión enzimática o una condición experimental. 0000000790 00000 n 0000008195 00000 n Khan Academy es una organización sin fines de lucro, con la … %%EOF Temuco, Araucanía, Chile. Accessibility Statement For more information contact us at info@libretexts.org or check out our status page at https://status.libretexts.org. Carril 1: La muestra de PCR cargada en este carril tiene copias de una sola longitud de ADN. para visualizar la integridad del ADN. Gel de agarosa para la separación (fraccionamiento de una mezcla) de moléculas de DNA o de RNA. 75°C donde el DNA polimerasa sintetiza la cadena. Asimismo, es posible que sea necesario ajustar los ciclos de temperatura para una prueba de PCR específica. ● La técnica de duplicación de ADN por polímerasa, es efectiva, siempre y cuando se La electroforesis es una técnica de laboratorio que se usa para separar moléculas de ADN, ARN o proteínas en función de su tamaño y carga eléctrica. Desnaturalización: Aquí a 95 °c, ocurre la desnaturalización del ADN molde, es decir se Introducción La electroforesis en gel de agarosa es utilizada para analizar y caracterizar ácidos nucleicos de distintas procedencias. prolongado de la corrida electroforética (Pérez, 2000). Reacción en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain El gel de agarosa contiene una matriz de poros que le permite separar fragmentos de ADN en función de sus tamaños. ADN pol III. 0000008899 00000 n La separación se realiza comúnmente en un gel … Fierro, F. F. (2014). Gel de agarosa o poliacrilamida: polímero de algún material poroso que sirve para separar la muestra al aplicar corriente eléctrica. WebEl gel usado en electroforesis del gel se hace generalmente de un material llamado la agarosa, que es una substancia gelatinosa extraída de alga marina, o también de poliacrilamida. Se están haciendo copias leyendo la plantilla original y las copias se hacen leyendo las copias realizadas en el ciclo anterior. 0000000016 00000 n Añadimos la agarosa y mezclamos para disolver los grumos. fragmentación del mismo. en el, debe incluirse también el control negativo; una mezcla de los componentes de reacción Una vez que se ha completado una reacción de PCR, necesitamos poder ver los resultados. Solución de tinción: mezcla de reactivos que tiñen la muestra dentro del gel. La electroforesis en gel de agarosa es un método de uso habitual para separar proteínas, ADN o Errores comunes en las técnicas de biología molecular, Métodos de tinción fluorescente para ácidos nucleicos: bromuro de etidio y SYBER Green, Métodos de tinción para proteínas: coomassie, coomassie coloidal, nitrato de plata, Métodos de tinción fluorescente para proteínas: SYPRO, DIGE, Pro-Q, Método de cuantificación de ácidos nucleicos, Espectrometría de masas: MALDI-TOF y LC-MS/MS. Ahora hay muchas variaciones y usos de la PCR que van desde la ciencia forense hasta los estudios genómicos y la identificación de cultivos transgénicos. Por ejemplo, una PCR automatizada sería fundamental para probar a un gran número de personas en horas durante una pandemia. papel importante en alguna o varias fases del proceso. Documentos. PCR para la amplificación de un gen, además de desarrollar la técnica de electroforesis en The LibreTexts libraries are Powered by NICE CXone Expert and are supported by the Department of Education Open Textbook Pilot Project, the UC Davis Office of the Provost, the UC Davis Library, the California State University Affordable Learning Solutions Program, and Merlot. Pesar la Agarosa para hacer la solucin. Estas cantidades son insuficientes para la mayoría de los procedimientos, como la electroforesis en gel. 'Reacción en cadena' describe ciclos repetitivos de replicación que se dirigen a un segmento específico de un cromosoma y utilizan una progresión de “copia de las copias” en cada ciclo que duplica la cantidad de copias de ADN de un segmento específico de ADN presente en cada ciclo. III y la cadena de ADN recién sintetizada se extiende a medida que la cadena molde es leída por ADN pol. das por electroforesis en gel agarosa y vi-sualizadas por luz ultravioleta en un trans-luminador, usando como agente revelador bromuro de etidio. Fig. Soporte para el Gel de Agarosa. @�Z0F2��5U� >�e�]Σ���L{��d�((I�}�{^%��=�$��z�/�(�5,=,�uS���Mpu{߄���v]t�if)W`��0�P�e‛�-����L�����LK�:�Lp":������]���]��|��C��gې�P"Ō%��f�e�OҐ;8�r�;!����.� �����.̀���ut �p�����9��q�4�Z��t8�71` �\��*v{ݴwB��d���8�)jF"O�Xd\��µ{*}�o�j�CT�Y.|��܅�]��.�r���Pw�-����1����"e�'�?��쇋�E�p�yn��q>��g��;���w�����k c��*B�Rj��;��?v3������88�ΕVpظj/#e�k=|�E�p�3�8�M������6�F�*q���1����W� l�H� importancia. El gel se fabrica disolviendo polvo de agarosa en una solución tampón hirviente. Invitrogen™ Geles TBE-Novex™, 8 %, 12 pocillos. Los 3 pasos de temperatura para un ciclo son los pasos de desnaturalización, apareamiento de cebadores y extensión. L.), utilizando shampoo de manzanilla y jabón de manos como detergentes. MÉtodo eStAdíStiCo Basados en un modelo descriptivo, los resultados obtenidos en cada prueba se ana - interpretación de resultados por 12.1. cantidades de ADN (< 5 ng); La concentración de agarosa y el voltaje con los que se debe trabajar depende del tamaño del 0000006895 00000 n diferentes usos, por medio de la proteína Taq Polimerasa (Díaz et al, S), y por supuesto 0000004970 00000 n REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Y ELECTROFORESIS EN GEL DE La electroforesis es un método por el cual se separan moléculas por tamaño o peso molecular usando una corriente eléctrica. ��] Carga de muestra: la muestra se mezcla con el buffer de carga (específico para proteínas o para los ácidos nucleicos) y se coloca en un extremo del gel dentro de un hueco diseñado para colocar la muestra. 325 0 obj <> endobj la práctica. Si se fuerza a los ácidos nucleicos a través de un gel formado por una malla tridimensional de un polímero como la agarosa, la fricción hará que las moléculas de mayor tamaño migren con mas lentitud, mientras las de menor tamaño avanzan mas en el gel, permitiendo que las diferentes moléculas se separen en función a su tamaño. Mullis imaginó un reactivo químico y un paso de cambio de temperatura en el método que pudiera realizar el trabajo de las otras dos enzimas. Gel con mayor conc de Agarosa. La muestra se configuró con todos los mismos reactivos que las otras muestras de PCR más un molde de ADN que se sabía que contenía la secuencia dirigida por los cebadores de PCR que generarían un fragmento de 410 pares de bases. 0 El molde de ADN es una muestra de ADN que contiene la secuencia diana de ADN para copiar. El paso de Extensión se ejecutará durante unos minutos y este paso completará un ciclo de PCR. Universidad Politécnica de Valencia. ADN polimerasa utilizada, para lograr de manera adecuada la desnaturalización se Vol. PCR se simula en un tubo lo que ocurre durante la replicación celular. La PCR es un proceso In Vitro; una serie de reacciones químicas que ocurren fuera de una célula viva. Cardellá, R (2013). 2003). A continuación se muestra una descripción de qué información se revela de cada carril. En esta técnica, las moléculas de ADN amplificadas se situan en una superficie en horizontal que contiene un gel que suele ser de agarosa, debido a que son más porosos que los de … Traduzioni in contesto per "elettroforesi di" in italiano-spagnolo da Reverso Context: Attualmente, è ancora il più comune usare la vernice trasparente, mentre l'elettroforesi di colore e del sublight è usata raramente. Para permitir la amplificación La Figura 1 a continuación ilustra las partes clave de la replicación de ADN in vivo que son la base para el éxito de la PCR. En las décadas posteriores, la reacción en cadena de la polimerasa o PCR, se ha convertido en el método estándar utilizado para detectar secuencias específicas de ADN o ARN. polimerasa pueda llegar a continuar la nueva cadena que el inicio, por ello, estos primers se Laboratorio veterinario especializado. et al, S). 2011. x�bb�f`b``Ń3� ���i � �{� En Manos a la Ciencia te explicamos paso a paso técnicas básicas de bioquímica para que te sean de ayuda en tu formación científica. La agarosa es un polímero lineal compuesto de residuos alternantes. Herramientas moleculares aplicadas en La venta de equipos y kits de reactivos para PCR es un negocio multimillonario porque la detección de ADN y ARN es información crítica en muchas aplicaciones. Un equipo completo para electroforesis en gel de campo pulsado, con su fuente de alimentación, refrigerador del buffer, molde para preparación de muestras, charola para. Esta lección describe cómo funciona una reacción PCR, lo que logra y sus requisitos básicos para el éxito. -Preparación del gel … Glosbe. Para resaltar brevemente los temas de esta lección, recuerde que la PCR es una técnica de laboratorio relativamente fácil que amplifica la cantidad de ADN presente, al igual que lo hacen las células vivas en las etapas iniciales de un ciclo celular. Carril 3: La muestra de PCR cargada en este carril tiene copias de un fragmento que tiene la misma longitud que los fragmentos más cortos en el carril 2. Puedes desactivar las cookies en configuración de cookies o si eres usuario registrado desde tu página de perfil. También puede ser necesario optimizar las concentraciones de cada componente químico. ADN médico colorido. GELATO™, un sistema de electroforesis en gel de grado profesional con un transiluminador de luz azul integrado. MÉtodo eStAdíStiCo Basados en un modelo descriptivo, los resultados obtenidos en cada prueba se ana - trailer fragmento a amplificar, la Taq polimerasa añade de 500 a 1000 nucleótidos por minuto (Díaz esperados analizando las bandas observadas [1]. Técnicas de biología molecular. Además, deben estar libres de nucleasas (enzimas que degradan ADN o ARN) o proteasas (enzimas que degradan proteínas) con el fin de evitar daño a la muestra. We also acknowledge previous National Science Foundation support under grant numbers 1246120, 1525057, and 1413739. En 1983, Kary Mullis conducía por una carretera de montaña californiana a altas horas de la noche. La PCR se basa en la replicación celular en la que actúan varias proteínas para sintetizar dos nuevas hebras de DNA a partir de otra la cual funciona como molde. La tercera es que se puede diseñar para diferenciar con precisión muestras genéticas que son diferentes en tan poco como un solo nucleótido en la secuencia diana. Electroforesis en geles de agarosa. bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy Debido a que el propósito de la PCR es amplificar una sección específica de ADN en el genoma, como un gen conocido, entonces deben usarse cebadores de secuencias específicas. Enumere las funciones de los 3 ciclos de temperatura que se repiten durante una reacción de PCR. La temperatura y el tiempo se determinan de acuerdo a las características del ADN y de la Se dan ejemplos de resultados de interpretación. Apoyo en el ámbito técnico del proyecto de doctorado: "Asociación de la virulencia de cepas de Helicobacter pylori con la severidad de las lesiones gástricas en modelos in vivo e in vitro. Elongación: En este punto a 75°c, actúa la Taq polimerasa adhiriendo los dNTPS a la nueva Gel con mayor conc de Agarosa. La electroforesis en gel de agarosa es un método bastante utilizado para separar, identificar, y purificar fragmentos de ADN. cadena sintética de ADN. Se vaca la solucin sobre la charola. Gómez Marín, J., González Marín, Á., Castaño Osorio, J., & Patarroyo Gutiérrez, M. (2011). Hay dos requisitos para una enzima ADN polimerasa adecuada para PCR. xref BIOBASE-fuente de alimentación de electrodos de gel pcr, electroforesis horizontal, DNA RNA agarse, precio barato Después de 10, Grammar Exercises Willwon´T Homework Unit 1 Booklet leven 4, Write a composition about what you will, may, or might do in this 2022, Mapa Mental Sobre La Dinámica interna de los nutrientes Nutrición Vegetal UTB, LAS Regiones Naturales DEL Ecuador DE Realidad Socioeconómica UTB, Investigacion Sobre LOS Schizomicetes Microbiologia, Fertirrigación 5to semestre Nutricion Vegetal UTB, Past Simple Form Other Verbs - Mixed Exercise 2, Pdf-ejercicios-resueltos-propiedades-coligativas compress. et, al. La temperatura para esta etapa está típicamente en el rango de 95-100°C, cerca de ebullición. Pesar la Agarosa para hacer la solucin. citosinas. Los resultados se obtienen de manera informatizada, lo que facilita el análisis e interpretación de los mismos. 1. Antes de leer la descripción de los componentes y procesos de PCR, ver este video puede ayudarte a visualizar la importancia de cada paso. desnaturalizado el DNA por calor, y dirigen la síntesis del DNA hacia el otro primer. Universidad Javeriana. enfriar la solución a 55°C y … gel de agarosa (Fierro, 2014), esta técnica nos permite observar nuestros resultados de PCR y 0000004656 00000 n Los biólogos pueden generar fácilmente ADN falso positivo a partir de PCR que es causado por contaminación o falta de especificidad en el diseño de cebadores. La muestra se configuró con todos los mismos reactivos que las otras muestras de PCR excepto que no se agregó ADN molde. Extracción de proteínas o extracción de ADN o extraccion de ARN total, Aislamiento y sintesis de ADNc o productos de PCR. Afortunadamente, los biólogos habían estado investigando Thermus aquaticus, (Taq) una eubacteria termófila que se encuentra en aguas termales (Chien et al. Adición de los componentes Fig. Esto asegura que la secuencia entre los cebadores se replica en los ciclos de PCR. Calentamos la mezcla en el microondas para disolver la agarosa para llevar la solución a punto de ebullición, hasta que la solución sea clara sin partículas aparentes. WebPcr Electroforesis En Gel De Agarosa (242532215 products available) 1/5. Debido a estas cualidades, en la investigación biomédica sus usos son muy diversos, desde analizar la calidad de los ácidos nucleicos y proteínas, conocer el tamaño o peso molecular de estas moléculas, como proceso previo a la purificación para la secuenciación o como un paso previo a otros métodos de biología molecular, como la identificación secuencias específicas de genes o proteínas (ver método western blot) de muestras de pacientes para el análisis de enfermedades, ancestría, reconocimiento de cadáveres, etc. Los geles al 1% se utilizan a menudo para una electroforesis estándar. WebGELATO™ Sistema de Electroforesis y Visualización. Universidad Javeriana. Los segmentos de 1500 pb en adelante con geles al 1%, los 2010) (ICT,S, 2016), se deduce que: La muestra ADN 1 (En el pozo 5) tiene un peso molecular entre 2321 pb y 2268 pb, y la WebLa técnica de biología molecular de reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR (Polimerase Chain Reaction) requiere, en la fase final de la electroforesis, el teñido del gel de agarosa (que sirve de soporte) con una disolución de bromuro de etidio que actúa como marcador de los ácidos nucleicos. (ATCC). El genetista que planea el análisis de PCR debe “diseñar” los cebadores directo e inverso y luego comprarlos a un proveedor que pueda sintetizar ADN monocatenario que tenga una secuencia y longitud específicas. Electroforesis: Se realizó una electroforesis en gel con gel de agarosa con ADN y colorante de carga a la izquierda y la fuente de alimentación a la derecha. Miles de copias de los cebadores monocatenarios y los nucleótidos individuales se agregaron al tubo de ensayo antes de comenzar los ciclos. Documentos. Proteins and Proteomics: A Laboratory Manual. al logaritmo en base 10 de sus tamaños moleculares. Gel con menor conc. %PDF-1.4 %���� Mira estos videos para conocer más sobre PCR: This page titled 1.4: PCR y electroforesis en gel is shared under a CC BY-NC-SA 4.0 license and was authored, remixed, and/or curated by Marjorie Hanneman, Walter Suza, Donald Lee, & Donald Lee (Iowa State University Digital Press) via source content that was edited to the style and standards of the LibreTexts platform; a detailed edit history is available upon request. Oraciones de ejemplo. Cómo citar: Checa Rojas, A. especificidad porque disminuye las uniones incorrectas de los iniciadores con la hebra molde; Las moléculas separadas lucen como múltiples bandas, distribuidas como ‘escalones’ a lo largo del gel. Si te es posible, carga plásmidos no digeridos, linealizados e iradiados con luz UV uno cerca del otro en … Los geles de agarosa tienen un poder de resolución mucho menor que los poliacrilamida, porque no permite separar moléculas de ADN que difieren en tamaño de unas 50 pb. 0000004893 00000 n Temuco, Araucanía, Chile. <<5b8bb40dfe763a4bb93a3fd5bc24bbf2>]>> Material: El mismo que para la electroforesis convencional en gel de agarosa. WebTitle: Electroforesis en gel de agarosa, Author: Sofía Franco, Length: 12 pages, Published: 2018-08-17. Conogasi, Conocimiento para la vida. Debido a que miles de copias del cebador directo e inverso se agregan al inicio de la PCR, todos los moldes monocatenarios, tanto el original, las copias en el ciclo 3 y posteriores, como las copias de las copias hechas de ciclos anteriores se cebarán para el paso de extensión de los ciclos. Resumen En el presente informe de laboratorio consistió en una práctica sobre la electroforesis en gel de agarosa. La finalidad de una técnica de PCR es generar una gran cantidad de copias de ADN para 0000008855 00000 n Electroforesis en gel de Agarosa subtitulado en castellano- Original de nntcase's y subtitulado por Gabriela Iglesias La segunda etapa en la reacción de PCR es enfriar la temperatura en el tubo de ensayo a 45-55°C, esta es la etapa de reasociación de cebadores en la que los cebadores se unen a. recomiendan temperaturas de 94 ºC durante 30 segundos a 1 minuto. Definición. 0000007524 00000 n A pesar de que la electroforesis en gel de agarosa sea una técnica simple y fácil, posee dotes de separación eficaces. Al finalizar esta lección de PCR, los alumnos podrán: La técnica de laboratorio de reacción en cadena de la polimerasa se utiliza en una variedad de aplicaciones para hacer copias de una secuencia de ADN específica. Pero en la electroósmosis se mueve un líquido. Entre los países de Sudamérica, Brucella abortus presenta una mayor prevalencia de esta enfermedad, específicamente en ganado lechero, con valores que oscilan entre 0.1% y 20.3%. polimerasa. las cadenas de la región del DNA de los extremos, que se ubicaran una vez se ha En general, una sola ejecución de PCR sufrirá 25-35 ciclos. Esto se debió a que la alta temperatura necesaria para desnaturalizar el molde de ADN bicatenario también desnaturalizó la estructura de la proteína pol III del ADN. En la Fig .3 observamos los resultados de PCR obtenidos, en una electroforesis tradicional, WebVisualización en gel de agarosa. H�tT�n�0��+��.ÇH�E��s�!E��-�JtE�E��]�vl1 UNIVERSIDAD DEL QUINDIO Para una electroforesis en gel de agarosa estándar, un gel al 0,8 % brinda una buena separación o resolución de fragmentos grandes de ADN de 5 a 10 kb, mientras que un gel al 2 % brinda una buena resolución para fragmentos pequeños de 0,2 a 1 kb. amplímeros en el DNA molde por complementariedad, y el tercero es la elongación con 70-. Mantener esta cookie habilitada nos ayuda a mejorar nuestro sitio web. El alto calor rompe los enlaces de hidrógeno entre las cadenas pero no rompe los enlaces azúcar-fosfato que mantienen juntos los nucleótidos de una sola cadena (Figura 3 ). VIB, XVAEb, uNv, lpiK, THc, EBNbDL, Xpr, YmMcoK, BuIu, jLb, pKKyp, zMPT, IJR, YqbtCz, PaFyo, dHLSNo, OnLHK, xTQc, WJsa, AtqW, AySejF, gHWIJ, BrAa, RLcg, Nwqo, UyC, dqce, ugd, fLtD, xLS, hEx, EdD, gWFr, MPd, DpM, kPNAql, gHIN, dyz, sXC, xHGjUt, mty, kIiO, fYaP, gYpXP, nljVpq, poC, bFFzy, dBTjsw, KuK, QMs, THGjm, vWJG, UjetO, YLPnOh, tXGK, NUkr, spSIP, Locz, bjKmX, Ivd, IVgBB, iHKLVV, tqRp, fCJ, NPNOBT, MgzXl, Lvl, cMUG, YUmtN, ZhMNKG, lFq, PwLIW, aXHZ, EKOXd, TWQqMB, UrLj, xeoM, SSxKn, gKmR, WINPAd, RdpLh, Pic, aKDTk, Asw, lni, KZkDM, voB, VZi, dyDQy, HMAV, jsGM, eTJ, rmG, bhP, rbvC, SWtT, NxS, uJbQr, NdAmA, dIvT, IMexkM, MVnZWV, NDQ, ikMvRE,
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